A extração de DNA de células eucarióticas consta de três etapas: 1.
ruptura das células para a liberação do núcleo; 2. desmembramento dos
cromossomos em seus componentes básicos, DNA e proteínas; 3. separação do DNA e
dos componentes celulares. O bulbo da cebola ou morangos são usado por
apresentar células grandes, que se rompem quando picada/macerados liberando o
DNA. Um dos componentes do detergente, o dodecil (ou lauril) sulfato de sódio,
desnatura proteínas, separando-as do DNA cromossômico. O álcool gelado, em
ambiente salino, faz com que as moléculas de DNA se aglutinem, formando uma
massa filamentosa e esbranquiçada.
2. Objetivo: Observar moléculas de DNA desnaturado
comprovando a sua existência.
3. Material:
4. Métodos:
a. Colocar os morangos maduros dentro de um saco plástico e
macerá-los pressionando os morangos com os dedos até obter uma pasta quase
homogênea. Transferir a pasta de morango para um copo.
b. Em outro copo misturar 150 ml
de água, uma colher (sopa) de detergente e uma colher (chá) de sal de cozinha.
Mexer bem com o bastão de vidro, porém devagar para não fazer espuma.
c.Colocar cerca de 1/3 da mistura
de água, sal e detergente sobre o macerado de morango. Misturar levemente com o
bastão de vidro.
d.Incubar em temperatura ambiente
por 30 minutos. Mexer de vez em quando com o mesmo bastão.
e. Colocar uma peneira sobre um copo
limpo e passar a mistura pela peneira para retirar os pedaços de morango que
restaram.
f. Colocar metade do líquido
peneirado em um tubo de ensaio. Colocar apenas cerca de 3 dedos no fundo do
tubo.
g. Despejar delicadamente no tubo
(pela parede do mesmo), sobre a solução, dois volumes de álcool comum. Não
misturar o álcool com a solução. Aguardar cerca de 3 minutos para o DNA começar
a precipitar na interfase.
h. Usar um palito de vidro,
plástico ou madeira para enrolar as moléculas de DNA. Gire o palito na
interface entre a solução e o álcool.
5. Resultados e Discussão
1. Por que é
necessário macerar o material?
2. Em que etapa do
procedimento ocorre o rompimento das membranas das células do morango?
Explique.
3. Qual a função do
sal de cozinha?
4. Qual o papel do
álcool?
5. Por que você não
pode ver a dupla hélice do DNA extraído?
6. Considerando os
procedimentos da extração do DNA genômico, você espera obtê-lo sem quebras
mecânicas e/ou químicas?
7. O precipitado é
apenas DNA?
